导语
翻译后修饰(Post-translational modification, PTM)是指对翻译后的蛋白质进行共价加工的过程。它通过在一个或多个氨基酸残基加上修饰基团,可以改变蛋白质的物理、化学性质,进而影响蛋白质的空间构象和活性状态、亚细胞定位、折叠及其稳定性以及蛋白质-蛋白质相互作用。根据蛋白质翻译后修饰的专业数据库PhosphoSitePlus®(http://www.phosphosite.org)统计结果显示,目前研究较多的蛋白翻译后修饰包括磷酸化、乙酰化、甲基化和泛素化四类修饰。
原理
Cell Signaling Technology (CST)公司开发的针对蛋白质翻译后修饰(PTM)基序(motif)抗体,在肽段水平上免疫亲和富集带有不同PTM的肽段,利用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)进行定量分析,能够快速、准确、高通量地分析多种疾病相关信号通路关键节点蛋白磷酸化、乙酰化、甲基化和泛素化修饰的变化,满足创新性研究、生物标志物鉴定、药物靶点筛选和评价的需求。
根据所使用的抗体是否对肽段序列具有靶向性,PTMScan®技术分为PTMScan® Discovery以及PTMScan® Direct两大类。
PTMScan® Discovery
PTMScan® Discovery是在蛋白组整体水平上对带有某一种PTM的肽段进行特异性亲和富集,富集结果与肽段的蛋白来源没有关系,而肽段在样品中的相对丰度越高,越容易被鉴定。这种高通量的蛋白组学的研究方法特别适合分析某一PTM在不同条件下和不同样品中的定量变化。
通过将具有类似基序的抗体合并入一组进行单一免疫富集(例如将PKA、PKC、AMPK、Akt基序抗体组成亲碱性抗体组,因以上基序抗体都识别两侧有碱性氨基酸的磷酸化位点) , 发现与利用IMAC方法富集得到的磷酸化位点相比,基序抗体组免疫沉降鉴定出的磷酸化位点的独特性非常高。
PTMScan® Direct
PTMScan® Direct适用于分析某一信号传道通路中的关键节点蛋白的PTM的定量变化。
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