现购买整套蛋白电泳试剂可获得私人定制专属开盖器一枚。

        Western实验首先需要使用RIPA裂解液（P06M11）裂解样品，如裂解样品后需要做IP实验，则需要使用温和的RIPA裂解液(弱)（P06M12）。裂解样品的同时需加入蛋白酶抑制剂（P10C01）来抑制蛋白酶保护蛋白;  如果研究的是磷酸化抗体还需要加入磷酸酶抑制剂（P10C03-05）。

       在蛋白裂解完成后，使用BCA蛋白定量试剂盒（P06M16 ）对总蛋白定量,  保证蛋白上样量准确性和一致性。

       确定好上样量后，将蛋白样品变性。在样品中加入5×蛋白上样缓冲液(还原型)（P06M18），并且煮沸5min 使蛋白充分变性。如果需要研究蛋白二硫键或者非变性电泳，则需要使用其他种类蛋白上样缓冲液。

       样品制备完成后，需要制胶，上样和电泳。

       金普来蛋白预制胶（P10M01）省去了制胶时间，只需选择合适的浓度，即可跑出理想条带，并且在预制胶中还附赠蛋白电泳缓冲液速溶颗粒。

      金普来彩色预染蛋白Marker也是WB实验首选，开盖即用，直接上样；三色显色，易于识别；漂移量小，定位准确。

       转膜时使用的WB转膜缓冲液（P05B09）,转膜滤纸（P06M90）,转膜海绵（P06M92），PVDF膜（P06M60）等是转膜中最常用到的耗材。

       一般我们通过考马斯亮蓝和丽春红染液（P06M17 /23）来检验转膜效果的，考马斯亮蓝检测灵敏度更高；丽春红染液染色速度更快，更柔和，可根据不同的实验要求来选择染色液。

       WB中最常用的封闭液是含5%脱脂奶粉TBST/TBS，室温封闭1h。封闭用脱脂奶粉（P05B61）,TBST/TBS速溶颗粒（P05B04/03）我们均可提供。

       封闭完成后，使用TBST 清洗3 次，每次5 min，后可以进行抗体孵育和检测。根据一抗厂家推荐抗体稀释比稀释抗体，4℃过夜孵育更有利于抗体特异性结合。

       使用TBST再次洗膜后可结合二抗：金普来提供抗兔(P03S 02）/抗小鼠（P03S01）HRP二抗，稀释比高，背景干净。更有多种种属和荧光的二抗，满足免疫荧光等实验需求。

       一抗二抗孵育完成后，ECL化学发光法检测和DAB显色试剂盒是最常用的两种检测方法。ECL化学发光法有高敏和超敏两种试剂盒，能够分别检测到低皮克和飞克级别蛋白。金普来高敏ECL发光液（P06M31）灵敏度高，背景低，线性范围广，稳定性好，受到客户的广泛好评。

       做Western实验无需各处寻找试剂，金普来帮您一站式采购。金普来您实验的好帮手！

扫码关注我们

 

科研试剂一站搞定

帮您轻松做实验