市面上有多种方法可检测凋亡细胞 (Collins et al. 1997;Sanders 1997; Huppertz et al. 1999; Willingham 1999; Barrett et al. 2001)。许多方法虽然是凋亡特异的,但是却不能检测分离的细胞,如培养的细胞。而这些方法中,仅有检测DNA片段的TUNEL和ISNT法,可用于福尔马林固定石蜡包埋(Formalin-fixed paraffin-embedded, FFPE)组织切片。然而,阳性TUNEL信号虽然在坏死细胞和一些细胞中被发现,但是DNA的片段化之后会被修复,使其不是衡量凋亡细胞死亡的最佳指标 (deBoer etal. 2000)。Cleaved Caspase-3作为细胞凋亡级联效应的主要因子,将引起最终负责程序性细胞死亡的蛋白质发生改变(Hengartner, 2000)。通过商业化抗体检测Cleaved Caspase-3,优于上述多种方法,因为它可以更加特异和明确地确认凋亡是否发生(Gown et al,2002)。
使用免疫组化试剂盒
SignalStain® Apoptosis(Cleaved Caspase-3) IHC Detection Kit #12692直接检测凋亡标志物,不仅省去了配制或购买多种试剂的麻烦,而且省钱、灵敏。该试剂盒是进行人和小鼠FFPE组织切片中Cleaved caspase-3检测的最经济和方便的选择,可用于120 张FFPE组织切片的染色,包含以下组分:
试剂盒组分 |
描述 |
规格 |
储存温度 |
Cleaved Caspase-3 (Asp175) (D3E9) Rabbit mAb 9579 |
兔单抗,可检测人、 小鼠样本中Cleaved Caspase-3的内源性表达,适于IHC、IF、F应用 |
100 µl |
-20°C |
Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® SignalStain® Isotype Control |
同型对照 |
100 µl |
-20°C |
Normal Goat Serum 5425 |
山羊血清 |
2.4 ml |
-20°C |
SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) 8114 |
针对兔源一抗的增强型IHC检测试剂 |
12 ml |
4°C |
SignalStain® DAB Diluent |
DAB稀释液 |
12 ml |
4°C |
SignalStain® DAB Chromogen Concentrate |
DAB色原浓缩液 |
360 µl |
4°C |
Tris Buffered Saline with Tween® 20 (TBST-10X) 9997 |
TBST浓缩液 |
2.4 ml |
RT |
SignalStain® Antibody Diluent 8112 |
抗体稀释液 |
25 ml |
4°C |
主要特点:
1)Cleaved Caspase-3 (Asp175) (D3E9) Rabbit mAb #9579能够提供特异且灵敏的染色结果;
2)兔源同型对照经过预稀释,方便易用;
3)SignalStain® Boost IHC Detection Reagent (HRP, Rabbit) 基于聚合物反应,因而具有更高的灵敏度,更少的检测步骤,更少的由于内源性生物素染色引起的假阳性;
4)SignalStain®DAB Substrate提供了最高的对比染色和信噪比;
5)通过Cleaved Caspase-3抗体来检测凋亡标志物,更为直接,优于其它凋亡检测方法。
注意:购买SignalSlide® Cleaved Caspase-3(Asp175) IHC Controls #8104阳性对照片子与该试剂盒搭配使用,问题诊断更容易,结果更完美!
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