在非理想的条件下，内切酶切割与识别位点相似但不完全相同的序列，这一现象称星号活性。有人提出，这种“星号”活性可能是内切酶的一种普遍特性（1），如果提供给相应反应条件，所有内切酶都会出现非特异性切割。虽然星号活性产生的倾向性不同，但是当使用随酶提供的NEBuffer 时，内切酶不会产生星号活性。如果已经报道该酶存在星号活性，那么在产品目录、说明书和网站上会做说明。
酶识别特异性的改变受酶本身的性质及可能引起星号活性的反应条件影响。常见的引起酶识别改变的条件有：单碱基替换、识别序列外侧碱基缩短以及单链切刻（2）。有些酶显示在标准反应条件下序列特异性降低，并且有同源位点时，能够切开非同源（次级）位点（3）。
注：上述反应条件的改变对于每种酶的影响不同。
NEB 建议使用 50 μl 反应体系进行酶切。但在必须使用小体积酶切时，需要注意以上列举的各种情况以避免星号活性。
此外，可使用 NEB 的系列产品高保真内切酶（HF）可以使操作更简便。
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参考文献：
(1) Nasri, M.and Thomas, D. (1986) Nucleic Acids Res.14, 811.
(2) Barany,F. (1988) Gene, 68, 149.
(3)Bitinaite, J. and Schildkraut, I. (2002)Proc. Natl.Acad. Sci. USA, 99, 1164–1169.
(4) Nasri, M.and Thomas, D. (1987)NucleicAcids Res. 15,7677.
(5)Tikchonenko, T.I., et al. (1978)Gene,4, 195–212.