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技术资料
BrainPhys 神经元培养基
发布时间:2019-01-29 15:12 来源:未知
传统的培养基(如:Neurobasal ®培养基和Dulbeccos改良Eagle培养基(DMEM))虽然支持细胞存活,但会抑制神经细胞活性,包括:动作电位的产生和突触的活性BrainPhys™可更好地支持神经元在体外的功能性。在BrainPhys™中进行成熟培养的神经元经历与中枢神经系统(CNS)生理条件相似的生长环境,因此在培养物中具有突触活性的神经元的比例相对较多。此外,BrainPhys™增强了神经元在体外培养中的生理相关性,从而提高了实验发现向临床应用转化的成功率。

图1.在BrainPhys™中培养的大鼠与人多能干细胞衍生的神经元显示更优异的兴奋性突触活性 。(A-B)大鼠的皮层神经元在体外培养21天;(C-D)人多能干细胞衍生的神经元在体外培养65天。与传统培养基相比,BrainPhys™培养基培养的神经元显示出更强的自发AMPA受体电流频率和振幅。

作为一个灵活的神经元基础培养基,BrainPhys™在加入了适当的神经元添加物、细胞因子或小分子后,可应用于多种神经元培养和分化流程之中。由于BrainPhys™支持神经元功能,因此在无需更换培养基的情况下即可在培养物中进行各项针对神经元活性的检测(如:钙成像、微电极阵列记录(MEA),以及光遗传学等)。这一点极大简化了实验流程,最大限度减少了因培养环境发生改变对细胞造成的影响。

图2.在BrainPhys™中分化14天后的hPSC所衍生神经元表达成熟神经元标志物

首先使用STEMdiff™神经诱导培养基以基于类胚体的流程将H9细胞生成神经祖细胞(NPCs)。然后,将NPCs培养于BrainPhys™中,并加入2% NeuroCult™SM1添加物、1% N2添加物A、20 ng/mL GDNF、20 ng/mL BDNF、1 mMdb-cAMP和200 nM抗坏血酸,以启动神经元的分化。分化14天后,神经元形成较长的突起,并表达Synapsin1(A-B,绿色)和MAP2(A,C,红色)。比例尺:50μm。

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